碘乙酰-LC-生物素

产品货号：

GS4324

中文名称：

碘乙酰-LC-生物素

英文名称：

Iodoacetyl-LC-Biotin

产品规格：

50mg

发货周期：

1～3天

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碘乙酰-LC-生物素(Iodoacetyl-LC-Biotin)是长链巯基反应性的生物素化试剂。碘乙酰-LC-生物素不溶于水，必须溶解在有机溶剂如DMF中，然后再进一步在水溶液中稀释。试剂中的碘代乙酰基团与巯基(-SH)基团能够快速发生特异性的反应，特别是当仅含微量的试剂与过量的巯基时，反应在pH8.3(7.5~8.5)下进行。反应通过碘与硫醇(巯基)的亲核取代发生，得到稳定的硫醚键。如果分子上的硫醇不可用，则能够在组氨酸侧链上发生反应(pH6.9～7.0)，但该反应必须至少进行一周的时间。若pH> 10，碘乙酰基试剂也能够与氨基反应。

分子式	C₁₈H₃₁IN₄O₃S
分子量	510.43
间隔臂	27.1 Å
净增加质量	382.53
纯度	＞95% on TLC
溶解度	在DMF中> 2mg/mL，然后在水或缓冲液中稀释
结构式

产品组成

组分	规格
Iodoacetyl-LC-Biotin	50mg
说明书	1份

保存：4℃，干燥

碘乙酰-LC-生物素试剂对湿度敏感。为了避免产品中的水分冷凝，开瓶前必须先平衡至室温。4～8℃避光干燥保存。
反应缓冲液不能含有硫醇(巯基)。
与碘代乙酰基部分反应的分子必须具有游离的(还原的)巯基。可以用固定的TCEP二硫化物还原肽二硫键。使用5 mMTCEP在室温下还原高分子量蛋白质中的二硫键，30min，然后用脱盐柱去除TCEP。

用碘乙酰生物素试剂还原IgG和生物素化
以下方法中选择2-巯基乙胺-HCl(2-MEA)作为温和的二硫键切割试剂，用于生物素化准备中的还原IgG抗体(片段化IgG)。该方案也可以用于其他蛋白质，肽和分子的修饰。温和还原期间的蛋白质浓度不如2-MEA的浓度关键，50mM 2-MEA可以有效还原1～10mg IgG/mL。一般3～5倍的碘乙酰生物素试剂与巯基的摩尔比足以使其有效的生物素化。具体应用中巯基和生物素化试剂的量需要优化。

所需材料：

样品制备缓冲液：0.1M磷酸钠，5mM EDTA，pH6.0。
用样品制备缓冲液配制1mL 4mg/mL IgG(27μM)。
2-巯基乙胺-HCl(2-MEA)。
反应缓冲液：50mM Tris-HCl，5mM EDTA，pH8.0～8.3
脱盐柱：如D-盐葡聚糖脱盐柱。

操作步骤：

片段化IgG
- 1mL IgG溶液与6mg 2-MEA(50mM 2-MEA)混匀。
- 37℃孵育90min。
- 冷却至室温，用反应缓冲液平衡的脱盐柱除去过量的2-MEA。
用Iodoacetyl-LC-Biotin生物素化IgG片段
- 实验前，制备4mM Iodoacetyl-LC-Biotin：将2mg Iodoacetyl-LC-Biotin溶于1mL DMF中。
- 每毫升IgG片段溶液加入50μL Iodoacetyl-LC-Biotin。(终浓度为50μM片段化的IgG(铰链区巯基)，对应4倍过量的200μM Iodoacetyl-LC-Biotin)。
- 在室温下避光孵育90min。
  - 避光反应能够将释放的碘离子转化为可与酪氨酸残基反应的分子碘。
- 用反应缓冲液平衡的脱盐柱，去除未反应的生物素试剂。收集0.5mL级分，并通过280nm处的吸光度检测蛋白质的存在。脱盐柱处理时出现的第一个吸收峰对应于含有生物素化的IgG的级分。也可以通过透析除去未反应的生物素试剂。

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